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      胎牛血清使用中的常見問題

      作者:互聯網 發布時間:2014-09-22

      1、 如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?

      將血清從冷凍箱取出后,先置于28℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。

      長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復凍融。

      我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。

      2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?

      沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產品性質。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。

      3、實驗室如何選擇適合的血清?

      國內一致認為HYCLONE的血清是最好的,但是根據我在北美的經歷,國外一般認為GIBCOHYCLONE好,所以并不是價格決定質量,但是總的來說這兩種價格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細胞,國產的就夠用了。此外,由于國內HYCLONE,GIBCO并沒有生產線,我們只能從代理商那里買,而代理商又魚龍混雜,所以買到假貨的可能性也很大。所以,我一般會從直銷員那里買血清,有的國外生物公司由于剛剛進入中國,知名度不高,但是其實在國外已經做得很不錯了,如Wisent等,他們在國內有辦事處,我會從那里拿,血清的品質和HYCLONE不相上下,但價格相對優惠很多。

      4、 如何避免血清中產生沉淀?

      按如下操作可避免沉淀的產生:

      (1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。

      (2) 血清分裝凍存時,須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。

      (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。

      (4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。

      (5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

      (6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

      5、 培養基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?

      一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

      6、 為什么要熱滅活血清?

      加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

      7、 有必要做熱滅活嗎?

      實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

      若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間,更確保血清的質量!

      8、細胞培養中出現黑點是污染嗎?如何處理?

      一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

      如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現可能與以下幾種情況有關:

      (1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;

      (2)血清質量不好,反復凍融的結果;

      (3)配制培養基的pH值偏高,不宜細胞生長;

      (4)配制培養基的水質、容器不合格??蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點;

      (5)培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。

      9、 細胞培養中如何防止黑點生成?

      (1) 盡可能地減少血清凍融次數。

      (2) 培養基無需37℃水浴。

      (3) 培養基保持最佳PH7.0- 7.2。

      (4) 嚴格控制配制培養基的水質,容器定期刷洗。

      (5) 掌握細胞傳代的最佳時機,細胞切勿生長過老。

      10、小牛血清和胎牛血清有何區別與注意事項?

      來源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生1014 天的小牛。

      組份與比例不同:兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細胞必需胎牛血清才能生長,而有些細胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。

      血清保存和使用須注意:血清應保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時 ,應先將血清至于2-8℃冰箱,并經常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,絕對不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活后,應按用量分裝并于-20℃保存,避免反復凍融。

      文章來源:生物幫