<th id="mgmbe"><u id="mgmbe"></u></th><dd id="mgmbe"><center id="mgmbe"></center></dd>
    <dd id="mgmbe"></dd>
    1. <rp id="mgmbe"></rp>

      <progress id="mgmbe"></progress>

      <li id="mgmbe"><acronym id="mgmbe"></acronym></li>

      聯系我們

      CONTACT US

      廈門施科生物科技有限公司
      地址:廈門火炬高新區(翔安)產業區翔星路98號強業樓406室

      電 話:0592-5771844 

      手 機:15860722185

      郵 箱:63706983@qq.com

      Western Blot化學發光(ECL)為什么出現高背景?

      作者:英格恩 發布時間:2014-08-13

          

         做Western Blot發光實驗經常有“背景太高”問題的出現,要弄清“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是發光,影響發光的因素就會影響背景。

         影響發光的因素主要有:1.HRP的抗體;2.發光試劑;3.和發光試劑反應的雜質,如含雜質的膜。這里面,在很短時間內曝光造成的背景多是由于含HRP的抗體的因素造成的,抗體濃度過高,洗滌不充分,封閉不充分等都可以造成抗體在膜上的非特異結合,制造背景;轉移膜包括最后曝光時包裹的塑料薄膜,含有雜質也會制造背景,這種背景較容易發現鑒別。

         值得注意的是,發光試劑不好,也會制造背景,這在較長時間曝光的情況下明顯,有人做過實驗,在較長曝光(30分鐘以上),優質的發光試劑背景明顯較一般的發光試劑背景低,得到的圖像也更漂亮,結果也更可靠。

          對一些實驗來說,如果實驗結果本應是多條帶,只是一些帶由于蛋白量多較強,短時曝光即可檢測,而另一些帶由于蛋白量相對較少,需要長時間曝光才可檢測,這時候主要的影響因素就是發光試劑,因為如果加大抗體的量,普通的發光試劑背景也會相應加大,影響較弱條帶的檢測,如果減少抗體的量,普通的發光試劑較弱條帶不易檢測,長時間曝光同樣隱藏在背景之中。這時如果不知道還有較弱條帶的存在,實驗的結論實際上被發光試劑影響了。如果有能長時間曝光而低背景的發光試劑,那么得到的結果就會非??煽?。

          所以,較好的抗體和實驗過程,再采用優質的發光試劑,就可以減少背景,得到漂亮、真實、可靠的發光結果。